人ELISA試劑盒通常,酶聯(lián)免疫反應曲線是規(guī)則的,如果曲線不規(guī)則說明實驗穩(wěn)定性差,宜做平行樣修正。做三平行樣取中間值,也可做雙平行樣,取算術(shù)平均值,但做雙平行樣時兩個樣本檢測值相差>20%時宜將該數(shù)值全部刪除。在ELISA檢測試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標本,加酶聯(lián)系物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不行濺起,不行產(chǎn)生氣泡。加標本通常用微量加樣器,按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,避免發(fā)作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
人ELISA試劑盒在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA檢測試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
(5)標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。
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