其實(shí)歸納總結(jié)下來,ELISA的操作步驟也不過就那么幾個(gè),每個(gè)步驟及關(guān)鍵注意點(diǎn)都熟練掌握之后,實(shí)驗(yàn)就會(huì)顯得容易簡單多了。今天的實(shí)驗(yàn)技術(shù)內(nèi)容中,上海晶抗公司對ELISA檢測步驟加樣的要求進(jìn)行著重介紹:
在ELISA檢測實(shí)驗(yàn)中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。
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